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 紫色色杆菌(基因组DNA)-脆弱链霉菌-SHMCCD62270

在现代分子生物学研究与临床诊断领域,实时荧光定量PCR(qPCR)技术因其高灵敏度、高特异性和快速检

10 mg/ml的溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)溶液是一种常用的核酸染料,广泛应用于分子生物学实验中,尤其是在DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳检测中。 EB是一种多环芳烃荧光小分子,能够嵌入核酸的碱基对之间。当EB与双链DNA(dsDNA)结合时,荧光强度会增强约25倍,与双链RNA(dsRNA)结合时,荧光强度增强约21倍。这种特性使得EB在低浓度下(如10 µg/ml)染色后无需脱色处理,即可在紫外光下清晰观察到核酸条带。 在使用10 mg/ml EB溶液进行电泳时,通常有两种染色方法: 电泳前染色:在制胶时加入EB,使其工作浓度达到0.5 µg/ml。例如,每100 ml的琼脂糖凝胶溶液中加入5-10 µL的10 mg/ml EB溶液,混匀后倒胶。 电泳后染色:将电泳后的凝胶浸泡在含有0.5 µg/ml EB的电泳缓冲液或水中,染色15-45分钟。 需要注意的是,EB具有较强的诱变性和毒性,操作时应佩戴手套和实验服,避免直接接触皮肤。此外,EB废液应按照实验室标准进行净化处理后再丢弃,以避免环境污染。

其中,2000 bp条带的浓度最高,约为100 ng/5 µL,其余条带浓度约为50 ng/5 µL

在分子生物学实验中,DNA的完整性和准确性是实验成功的关键。Uracil-DNA Glycosylase(UDG)是一种能够特异性识别并修复DNA中尿嘧啶(U)的酶,广泛应用于PCR反应和其他DNA合成实验中。然而,传统的UDG在反应结束后需要额外的处理步骤来失活酶活性,以防止对后续实验的干扰。热敏感型UDG(Heat-labile UDG)的出现,为这一问题提供了高效的解决方案。特别是来自鳕鱼(Cod)的热敏感型UDG,以其独特的热失活特性和高效性,成为了分子生物学实验中的重要工具。 热敏感型UDG的独特特性 Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (1U/μl)是一种从鳕鱼中提取并经过工程改造的UDG。与传统的UDG不同,这种酶在高温条件下(通常在95℃)会迅速失活。这一特性使其在PCR反应中具有显著优势。在反应开始前,UDG可以有效去除引物或模板中的尿嘧啶,防止非特异性扩增。而在PCR反应的高温变性步骤中,UDG会自动失活,无需额外的处理步骤,从而简化了实验流程。

该试剂盒采用一步法RT-qPCR技术,将逆转录和定量PCR反应集成在同一管中完成。

TAFE凝胶电泳缓冲液(10×)是一种专为核酸电泳设计的高浓度缓冲液,广泛应用于琼脂糖凝胶电泳实验中。它主要由Tris、乙酸和EDTA组成,能够为核酸电泳提供稳定的pH环境和良好的导电性。产品特性成分:主要由200 mM Tris-乙酸和5 mM EDTA组成。工作液浓度:稀释10倍后得到的1×TAFE工作液含有20 mM Tris-乙酸和0.5 mM EDTA,pH值约为8.2。高效分离:适用于分离小于1 kb的DNA片段,能够提供清晰的条带。缓冲能力强:在长时间电泳中,能够维持稳定的pH值,不易出现pH波动。保存条件:室温保存,有效期长达12个月。使用方法稀释:将10×TAFE缓冲液用蒸馏水或去离子水稀释10倍,制备1×工作液。电泳操作:将稀释后的1×TAFE缓冲液加入电泳槽中,确保缓冲液完全覆盖凝胶。加样后开始电泳,电泳条件根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的核酸染料(如EB或Goldview)染色。在紫外灯下观察核酸条带。注意事项沉淀处理:如果出现沉淀,可置于37℃水浴中使其溶解,不影响使用。

6×DNA Loading Buffer是一种六倍浓缩的上样缓冲液,主要用于DNA凝胶电泳。

在分子生物学和生物医学研究中,荧光定量PCR(qPCR)是一种广泛使用的高灵敏度和高特异性的基因表达分析技术。SYBR Green qPCR Mix (2×)作为一种专为qPCR设计的预混液,凭借其高效、便捷和高灵敏度的特点,成为了许多实验室的首选试剂。 SYBR Green qPCR Mix的核心优势 SYBR Green qPCR Mix (2×)是一种预配制的高浓度反应体系,专为qPCR实验设计。它含有优化的反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green荧光染料以及热启动Taq DNA聚合酶。SYBR Green是一种能够特异性结合双链DNA的小分子荧光染料,在qPCR过程中,随着DNA扩增产物的增加,SYBR Green发出的荧光信号也随之增强。通过实时监测荧光信号的变化,可以实现对目标基因的定量分析。 高灵敏度与特异性 SYBR Green qPCR Mix (2×)具有极高的灵敏度,能够检测到低丰度的基因表达。其优化的反应体系确保了高效的DNA扩增,即使在复杂的样本中也能获得准确的定量结果。

脱氧腺苷三磷酸(dATP)是DNA合成中的关键核苷酸之一,广泛应用于分子生物学的多种实验中即用型溶液

GTBE电泳缓冲液(1×)是一种专为DNA脉冲场凝胶电泳设计的缓冲液,广泛应用于分子生物学实验中。它由甘氨酸和TBE(Tris-Borate-EDTA)组成,能够提供稳定的电泳环境,特别适用于分离相对较小(小于2000 bp)的DNA片段。产品特性成分:主要由TBE缓冲液、甘氨酸和防腐剂等组成。缓冲能力:缓冲能力较弱,适合分离小于2000 bp的DNA片段。即用型设计:1×浓度,无需稀释,直接使用。稳定性高:室温保存,有效期长达12个月。使用方法制备凝胶:使用1×GTBE缓冲液制备琼脂糖凝胶。加样:将样品加入琼脂糖凝胶的加样孔中。电泳条件:适用于脉冲场凝胶电泳,电泳电压和时间根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的DNA染料(如EB或Goldview)染色,在紫外灯下观察DNA条带。保存与注意事项保存条件:室温保存,开封后尽快使用。个人防护:操作时需佩戴实验服和一次性手套,以确保安全。用途限制:仅供科研使用,不得用于临床诊断或其他非科研用途。

该试剂盒还采用了dUTP替代dTTP的技术,进一步提高了反应的特异性,减少了非特异性扩增的可能性。

在分子生物学实验中,PCR技术是不可或缺的工具,而Hot-Start Taq DNA Polymerase则是这一技术中的一颗璀璨明珠。它以其独特的机制和卓越的性能,为PCR反应的精准性和特异性提供了强有力的保障。 传统的Taq DNA聚合酶在室温下就具有活性,这意味着在PCR反应开始之前,引物可能会与模板发生非特异性结合,导致背景产物的产生,从而影响实验结果的准确性。而Hot-Start Taq DNA Polymerase通过特殊的化学修饰或物理方法,解决了这一问题。它在室温下处于“关闭”状态,只有在高温下才会被激活,从而有效避免了非特异性扩增的发生。 Hot-Start Taq DNA聚合酶的激活机制通常基于两种方式。一种是通过化学修饰,如在酶的活性位点引入可逆的化学基团,这些基团在高温下被去除,从而恢复酶的活性。另一种是通过物理方法,如将酶与抗体结合,抗体在高温下变性失活,从而释放出具有活性的Taq酶。无论哪种方式,其核心目标都是确保Taq酶在PCR反应的变性阶段才开始发挥作用。

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